سيل ڪلچر جي آلودگي کي مؤثر طور تي گھٽايو ويو

سيل ڪلچر جي آلودگي آساني سان سيل ڪلچر ليبارٽريز ۾ سڀ کان وڌيڪ عام مسئلو بڻجي سگهي ٿي، ڪڏهن ڪڏهن تمام سنجيده نتيجا پيدا ڪري ٿي.سيل ڪلچر جي آلودگي کي ٻن ڀاڱن ۾ ورهائي سگهجي ٿو، ڪيميائي آلودگي جهڙوڪ وچولي، سيرم ۽ پاڻي جي تڪليف، اينڊوٽوڪسين، پلاسسٽائيزر ۽ ڊٽرجنٽ، ۽ حياتياتي آلودگي جهڙوڪ بيڪٽيريا، مولڊ، خمير، وائرس، ميڪوپلاسما ڪراس انفيڪشن.ٻين سيل لائنن پاران آلوده.جيتوڻيڪ آلودگي کي مڪمل طور تي ختم ڪرڻ ناممڪن آهي، ان جي تعدد ۽ شدت کي گهٽائي سگهجي ٿو ان جي ماخذ کي چڱيءَ طرح سمجهڻ ۽ سٺي اسپيٽڪ ٽيڪنڪ جي پيروي ڪندي.

1. ھي حصو حياتياتي آلودگي جي مکيه قسمن کي بيان ڪري ٿو:
بيڪٽيريا آلودگي
مولڊ ۽ وائرس آلودگي
Mycoplasma آلودگي
خمير آلودگي

1.1 بيڪٽيريا آلودگي
بيڪٽيريا هڪ تمام وڏو گروهه آهن جن ۾ موجود واحد-سيل مائڪروجنزم آهن.اهي عام طور تي قطر ۾ صرف چند مائڪرون هوندا آهن ۽ مختلف شڪلين ۾ اچي سگهن ٿا، گولن کان وٺي راڊز ۽ اسپرلز تائين.ڇاڪاڻ ته انهن جي هر سطح، سائيز، ۽ تيز رفتار جي شرح جي ڪري، بيڪٽيريا، خمير ۽ ٺهيل سان گڏ، سيل ڪلچر ۾ سڀ کان وڌيڪ عام حياتياتي آلودگي آهن.

1.1.1 بيڪٽيريا آلودگي جي چڪاس
بيڪٽيريا آلودگي آساني سان ڪلچر جي بصري معائنو ذريعي معلوم ٿي ويندي آهي ان جي متاثر ٿيڻ جي ڪجهه ڏينهن اندر؛
متاثر ٿيل ڪلچر عام طور تي بادل (يعني turbid) نظر اچن ٿا، ڪڏهن ڪڏهن سطح تي پتلي فلم سان.
ڪلچر وچولي جي پي ايڇ ۾ اوچتو ڦڙا پڻ اڪثر سامهون ايندا آهن.
گھٽ طاقت واري خوردبيني جي تحت، بيڪٽيريا ننڍڙن طور تي ظاهر ٿيندا آهن، سيلن جي وچ ۾ گرينولز، ۽ هڪ اعلي طاقت واري خوردبيني هيٺ مشاهدو انفرادي بيڪٽيريا جي شڪل کي حل ڪري سگهي ٿو.

1.2 مولڊ ۽ وائرس آلودگي
1.2.1 مولڊ آلودگي
Molds فنگل بادشاهت جا يوڪريوٽڪ مائڪروجنزم آهن جيڪي ملٽي سيلولر فلامينٽس جي صورت ۾ وڌندا آهن جن کي هائفي سڏيو ويندو آهي.انهن گھڻ-سيلولر تنتن جي ڳنڍيندڙ نيٽ ورڪن ۾ جينياتي طور تي هڪجهڙائي واري نيوڪلي شامل آهن جن کي ڪالونيون يا مائيسيليم سڏيو ويندو آهي.

خمير جي آلودگي سان ملندڙ جلندڙ، ڪلچر جو pH آلودگي جي شروعاتي مرحلي دوران مستحڪم رهي ٿو ۽ پوءِ تيزي سان وڌي ٿو جيئن ڪلچر وڌيڪ سخت متاثر ٿئي ٿو ۽ بادل بڻجي وڃي ٿو.خوردبيني جي هيٺان، مائيسيليم عام طور تي فيلامينٽس هوندو آهي، ڪڏهن ڪڏهن spores جي گھڻن ڪلستر وانگر.ڪيترن ئي مولڊز جا spores انتهائي سخت ۽ غير مهذب ماحول ۾ پنهنجي غير فعال مرحلي دوران زندهه رهي سگهن ٿا ۽ صرف تڏهن ئي چالو ٿين ٿا جڏهن صحيح واڌ جي صورتحال سامهون اچي وڃي.

1.2.2 وائرس آلودگي
وائرس خوردبيني انفڪشن ايجنٽ آهن جيڪي ميزبان سيل جي مشينري کي ٻيهر پيدا ڪرڻ لاء وٺي ويندا آهن.انهن جي انتهائي ننڍڙي سائيز انهن کي ڪلچر ۾ ڳولڻ ۽ سيل ڪلچر جي ليبارٽريز ۾ استعمال ٿيندڙ ريجينٽ مان هٽائڻ ڏکيو بڻائي ٿي.ڇاڪاڻ ته اڪثر وائرسن کي پنهنجي ميزبانن لاءِ تمام سخت گهرجون هونديون آهن، ان ڪري اهي عام طور تي ميزبان کان سواءِ ٻين نسلن جي سيل ڪلچر تي منفي اثر نه ڪندا آهن.
بهرحال، وائرس سان متاثر ٿيل سيل ڪلچرز جو استعمال ليبارٽري جي عملي جي صحت لاءِ سنگين خطرو بڻجي سگهي ٿو، خاص طور تي جيڪڏهن انساني يا پرائيميٽ سيلز ليبارٽري ۾ پوکيا وڃن.

سيل ڪلچرن ۾ وائرل انفيڪشن کي اليڪٽران مائڪرو اسڪوپي، اينٽي باڊيز جي هڪ سيٽ سان اموناسٽيننگ، ELISA، يا PCR مناسب وائرل پرائمر سان ڳولي سگهجي ٿو.

1.3 Mycoplasma آلودگي
Mycoplasmas سيل جي ڀتين کان سواءِ سادو بيڪٽيريا آهن، ۽ انهن کي سمجهيو وڃي ٿو ته اهي سڀ کان ننڍا پاڻ کي نقل ڪندڙ جاندار آهن.انهن جي انتهائي ننڍڙي سائيز جي ڪري (عام طور تي 1 مائڪرون کان به گهٽ)، مائيڪوپلازما کي ڳولڻ ڏکيو آهي جيستائين اهي انتهائي تيز کثافت تي پهچي وڃن ۽ سيل ڪلچر کي خراب ڪرڻ جو سبب بڻجن؛ان وقت تائين، عام طور تي انفيڪشن جي ڪا واضح نشاني ناهي.

1.3.1 mycoplasma آلودگي جي چڪاس
ڪجھ سست وڌندڙ ميڪوپلاسما ڪلچرن ۾ جاري رھن ٿا بغير سيل جي موت جو سبب بڻجن، پر اھي ثقافتن ۾ ميزبان سيلز جي رويي ۽ ميٽابولزم کي تبديل ڪن ٿا.

دائمي mycoplasma انفيڪشن جي خاصيت ٿي سگھي ٿي سيل جي گھٽتائي جي شرح، گھٽتائي واري کثافت ۽ معطلي ڪلچر ۾ جمع ٿيڻ.
تنهن هوندي به، mycoplasma آلودگي کي ڳولڻ جو واحد قابل اعتماد طريقو اهو آهي ته ڪلچر کي باقاعده طور تي فلورسنٽ اسٽيننگ (مثال طور، Hoechst 33258)، ELISA، PCR، immunostaining، autoradiography، يا microbial testing استعمال ڪندي.

1.4 خمير آلودگي
خمير فنگس جي بادشاهي جي واحد-سيلڊ يوڪريوٽس آهن، جن جي ماپ ۾ ڪجهه مائڪرن (عام طور تي) کان 40 مائڪرن تائين (شايد ئي) هوندا آهن.

1.4.1 خمير جي آلودگي جي چڪاس
جيئن ته بيڪٽيريا آلودگي سان، خمير سان آلوده ثقافت بادل ٿي سگهي ٿي، خاص طور تي جيڪڏهن آلودگي ترقي يافته اسٽيج ۾ آهي.خمير سان آلوده ثقافتن جي پي ايڇ تمام ٿوري تبديل ٿيندي آهي جيستائين آلودگي وڌيڪ شديد ٿي وڃي ٿي، جنهن مرحلي ۾ پي ايڇ عام طور تي وڌي ٿو.خوردبيني جي هيٺان، خمير انفرادي ovoid يا گولائي ذرڙن جي طور تي ظاهر ٿئي ٿو ۽ ننڍا ذرات پيدا ڪري سگهي ٿي.

2. ڪراس انفيڪشن
جيتوڻيڪ مائڪروبيل آلودگي جيتري عام ناهي، هيلا ۽ ٻين تيزي سان وڌندڙ سيل لائنن سان ڪيترن ئي سيل لائينن جي وسيع ڪراس آلودگي هڪ واضح طور تي بيان ڪيل مسئلو آهي جنهن سان سنجيده نتيجا آهن.معزز سيل بئنڪن کان سيل لائينون حاصل ڪريو، باقاعدي سيل لائينن جي خاصيتن کي چيڪ ڪريو، ۽ سٺي اسپيٽڪ ٽيڪنڪ استعمال ڪريو.اهي طريقا توهان کي پار-آلودگي کان بچڻ ۾ مدد ڏين ٿيون.ڊي اين اي فنگر پرنٽنگ، ڪيريٽائپنگ ۽ آئوٽائپنگ تصديق ڪري سگھن ٿا ته ڇا توهان جي سيل ڪلچر ۾ ڪراس آلودگي آهي.

جيتوڻيڪ مائڪروبيل آلودگي جيتري عام ناهي، هيلا ۽ ٻين تيزي سان وڌندڙ سيل لائنن سان ڪيترن ئي سيل لائينن جي وسيع ڪراس آلودگي هڪ واضح طور تي بيان ڪيل مسئلو آهي جنهن سان سنجيده نتيجا آهن.معزز سيل بئنڪن کان سيل لائينون حاصل ڪريو، باقاعدي سيل لائينن جي خاصيتن کي چيڪ ڪريو، ۽ سٺي اسپيٽڪ ٽيڪنڪ استعمال ڪريو.اهي طريقا توهان کي پار-آلودگي کان بچڻ ۾ مدد ڏين ٿيون.ڊي اين اي فنگر پرنٽنگ، ڪيريٽائپنگ ۽ آئوٽائپنگ تصديق ڪري سگھن ٿا ته ڇا توهان جي سيل ڪلچر ۾ ڪراس آلودگي آهي.